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WestrnBlot的實(shí)驗(yàn)方法原理是什么?
更新時(shí)間:2018-07-26 點(diǎn)擊次數(shù):1691次
WestrnBlot蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗(yàn)),它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過(guò)特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過(guò)分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。
蛋白質(zhì)免疫印跡(WestrnBlot)從蛋白質(zhì)混合物中檢出目標(biāo)蛋白質(zhì);(2)定量或定性確定細(xì)胞或組織中蛋白質(zhì)的表達(dá)情況;(3)用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析。
實(shí)驗(yàn)方法原理:
WestrnBlot是Western免疫印跡(WesternBlot)利用抗體進(jìn)行檢測(cè)的方法。對(duì)已知表達(dá)蛋白,可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測(cè),對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物,可通過(guò)融合部分的抗體檢測(cè)。
與Southern或Northern雜交方法類似,但WestrnBlot采用的是聚WestrnBlot物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。
經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。