熒光定量PCR技術,顧名思義,就是在PCR的基礎上加入熒光基團,通過熒光信號的變化的實時監(jiān)測PCR的反應過程,zui后通過對未知模板進行定量分析的方法。
目前,熒光定量PCR已成為不同樣品間進行基因表達水平定量差異比較的權wei性方法。在過去十幾年中,該方法迅速流行,涉及科學的多個領域。
DNA有著雙螺旋結構,當溫度達到95攝氏度時,雙鏈的DNA會分解成為單鏈狀態(tài),而在溫度到達72攝氏度左右時,DNA聚合酶會沿著磷酸到五碳糖的方向進行合成。聚合酶鏈反應PCR就是通過不斷地調節(jié)溫度,以數量級的速度增加DNA數量的方法。而熒光定量PCR是指,在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號的變化實時監(jiān)測PCR擴增反應中每一個循環(huán)擴增產物量的變化,通過Ct值和標準曲線的關系對起始模板進行定量分析。
PCR技術已經廣泛應用于生物醫(yī)藥食品等行業(yè),應用于疾病的早期診斷、遺傳病的早期診斷、藥物研究、腫瘤的診斷與研究、食品病原微生物的檢測、轉基因食品檢測、動物疫病檢測等,除此之外,還包括:
1、基因擴增;
2、擴增特異性分析;
3、基因定量分析;
4、基因檢測;
5、基因分型;
6、SNP分析;
7、RFLP多態(tài)性分析;
8、單/多基因表達研究;
9、高通量基因表達譜研究等。
大量的熒光定量PCR研究資料表明,病原體數量與感染性疾病病情的輕重程度、傳染性及治療效果均有相關性。因此,通過熒光定量PCR方法得到的檢測結果,一定程度上可以準確反映疾病感染的情況。