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細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)步驟,分享給大家
更新時(shí)間:2021-01-26 點(diǎn)擊次數(shù):1150次
  細(xì)胞系中篩選出來(lái)細(xì)胞株的有特殊屬性的比如無(wú)線增值的。細(xì)胞株:通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱(chēng)為細(xì)胞株,也就是說(shuō),細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。
 
  細(xì)胞系是原代細(xì)胞經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系。泛指一般可能傳代的細(xì)胞。其中能夠連續(xù)傳代的細(xì)胞叫做連續(xù)或無(wú)限,不能連續(xù)培養(yǎng)的稱(chēng)為有限細(xì)胞系。大多數(shù)二倍體細(xì)胞為有限。由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限,可稱(chēng)為有限,如可以連續(xù)培養(yǎng),則稱(chēng)為連續(xù),培養(yǎng)50代以上并無(wú)限培養(yǎng)下去。人類(lèi)zhongliu細(xì)胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長(zhǎng)穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱(chēng)為連續(xù)性株或系。
 
  細(xì)胞系對(duì)于生物醫(yī)學(xué)研究是非常有價(jià)值的工具。然而,它們作為正?;蚧疾〗M織模型的有效性有賴(lài)于它們真的是研究人員所認(rèn)為的組織類(lèi)型和物種。ATCC細(xì)胞系作為體外模型而被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究。正確數(shù)據(jù)的獲得常常依賴(lài)于細(xì)胞系的特性,尤其是當(dāng)它用來(lái)替代其來(lái)源者的組織時(shí)。
 
  細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
 
  一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
 
  1)準(zhǔn)備培養(yǎng)基;北美胎牛血清,10%;雙抗1%。
 
  2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
 
  3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
 
  二.細(xì)胞系的菌種處理:
 
  1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
 
  2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。